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M-MuLV逆转录酶图片
产品货号:
GS2039
中文名称:
M-MuLV逆转录酶
英文名称:
M-MuLV Reverse Transcriptase
产品规格:
2kU|10kU|50kU
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

M-MuLV逆转录酶具有RNA和DNA依赖的聚合酶活性和RNase H活性。该酶的RNase H活性比禽类成髓细胞瘤逆转录酶(AMV)低很多。高效制备全长的第一链cDNA,最长可达13kb。最佳活性温度为42℃。温度高达50℃时仍有活性。合成掺入修饰核苷酸。




高效合成全长第一链cDNA至13kb,在42℃时的活性高达50℃的活性加入修饰的核苷酸。


◆ 第一链cDNA合成,用于RT-PCR和实时RT-PCR。
◆ 合成cDNA,用于克隆和表达研究。
◆ 制备芯片研究用标记的cDNA探针。
◆ DNA标记。
◆ 引物延伸法分析RNA。


含有克隆基因pol的大肠杆菌,该基因编码小鼠白血病病毒逆转录酶。


在37℃,10分钟内将1nmol dTMP合成掺入多聚的核苷酸片段所需要的酶量定义为1U。


组分2kU10kU50kU
M-MuLV逆转录酶(200U/μL)10μL50μL5×50μL
5×RT Buffer1mL1mL5×1mL

保存:-20℃


50mM Tris-HCl (pH7.5),0.1M NaCl,1mM EDTA,5mM DTT,0.1% (v/v) Triton X-100,50% (v/v)甘油。


5×Reaction Buffer:
250mM Tris-HCl (pH8.3@25℃),250mM KCl,20mM MgCl2,50mM DTT。


金属螯合剂、无机磷酸盐、焦磷酸和多胺。


70℃加热10分钟


一、cDNA第一链合成
  • 溶液融化后轻轻混匀,短暂离心后冰浴放置。按以下顺序在灭菌、无核酸酶的试管(冰浴放置)中加入以下成分。
    成分用量
    模板RNA总RNA10ng~5μg
    或poly(A)RNA1~500ng
    或特异性RNA0.01pg~0.5μg
    引物Oligo(dT)180.5μg (100pmol)
    或随机六聚体引物0.2μg(100pmol)
    或基因特异性引物15~20pmol
    DEPC水至12.5μL
  • 可选:如果RNA模板的GC含量较高或含有二级结构,轻轻混匀后短暂离心,65℃孵育5分钟后冰浴冷却,短暂离心后冰浴放置。
  • 按下表指定顺序加入各成分。
    成分用量
    5×RT Buffer4μL
    RNase inhibitor0.5μL(20U)
    dNTP Mix,10mM each2μL
    M-MuLV逆转录酶(200U/μL)1μL
  • 轻轻混匀后短暂离心。
  • 如果使用oligo(dT)18引物或基因特异性引物,42℃孵育60分钟。如果使用随机六聚体引物,25℃孵育10分钟后再用42孵育60分钟。如果需逆转录富含GC的RNA,可将反应温度增加到45℃。
  • 70℃加热10分钟终止反应。

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